化学蛋白质组学
化学蛋白质组技术利用能够与靶蛋白质发生特异性相互作用的化学小分子来干扰和探测蛋白质组，在分子水平上系统揭示特定蛋白质的功能及其与化学小分子的相互作用，从而寻找小分子(药物)的作用靶点。
我们已建立了基于TPP和DARTS两种的化学蛋白质组学检测流程。
常见化学蛋白质组学技术分类
应用领域
- 检测药物的靶点，尤其适合非单一靶点的药物
- 发现药物的脱靶点，解释副作用发生的机制
技术优势
- TPP和DARTS方法的原理基于蛋白与药物结合前后理化性质的改变，无需对药物进行化学修饰，避免了修饰对药物活性和亲和力的影响
- 高通量、可检测整个蛋白质组与小分子药物的相互作用
原理与方法
热蛋白组分析TPP
原理：TPP是在细胞热迁移分析（Cellular Thermal Shift Assay，CETSA） 基础上发展起来的一项组学技术，其原理是靶蛋白与药物分子结合时通常会变得稳定。蛋白随温度的升高会发生沉淀；当蛋白结合药物后，其复合物热稳定性增加，相同温度下沉淀的比例减少。
方法：药物处理细胞后在一定温度范围内加热，收集不同温度处理后的可溶性蛋白做定量蛋白质组检测，对每个蛋白构建随温度变化的定量变化曲线（热熔曲线），比较药物处理前后的热熔曲线变化。
药物亲和响应的靶标稳定性DARTS
原理：小分子药物结合后可以保护靶蛋白使其对蛋白酶的敏感性降低。
方法：将小分子药物与样品蛋白共孵育一定时间后，加入蛋白酶进行消化。电泳凝胶染色后，对比加药物与不加药物的消化组，找出受保护的条带，再通过质谱鉴定物靶标蛋白。
技术比较
因采用的理化原理不同，TPP与DARTS各有适用范围
TPP
- 可在体内活细胞中检测药物与靶点蛋白的相互作用
- 不适用膜蛋白和热不敏感蛋白
DARTS
- 因为该技术需要利用凝胶染色进行可视化比较，所以其在低丰度靶蛋白的鉴定上存在一定的局限性